一把藏刀
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一把藏刀
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gmp词汇
FDA（ Food and drug administration ）：（美国国家）食品药品品管理局
IND（ Investigation new drug）：临床研究申请（指申报阶段，相对于NDA而言）；研究中的新药（指新药开发阶段，相对于新药而言，即临床前研究结束）
NDA（New drug application）：新药申请
ANDA（Abbreviated New drug application）：简化新药申请
EP诉（Export application）：出口药申请（申请出口不被批准在美国销售的药品）
Treatment IND：研究中的新药用于治疗
Abbreviated New drug：简化申请的新药
DMF（Drug master file）：药物主文件（持有者为谨慎起见而准备的保
密资料，可以包括一个或多个人用药物在制备、加工、 包装和贮存过程中所及的设备、生产过程或物品。只有在DMF持有者或授权代表以授权书的形式授权给FDA，FDA在审查IND、NDA、ANDA时才能参考其内容）
Holder：DMF持有者
CFR（Code of federal regulation）：（美国）联邦法规
Panel：专家小组
Batch production：批量生产；分批生产
Batch production records：生产批号记录
Informed consent：知情同意（患者对治疗或受试者对医疗试验了解后表示同意接
受治疗或试验）
Prescription drug：处方药
OTC drug（over—the—counter drug）：非处方药
U．S．Public Health Service：美国卫生福利部
NIH（NATIONAL INSTITUTE OF HEALTH）：（美国）全国卫生研究所
Clinical trial：临床试验
Animal trial：动物试验
Accelerated approval：加速批准
Standard drug：标准药物
Investigator：研究人员；调研人员
Preparing and Submitting：起草和申报
Submission：申报；递交
Benefit（S）：受益
Risk (S）：受害
Drug substance：原料药
Established name：确定的名称
Generic name：非专利名称
Proprietary name：专有名称；
INN（international nonproprietary name）：国际非专有名称
Narrative summary记叙体概要
Adverse effect：副作用
Adverse reaction：不良反应
Archival copy：存档用副本
Review copy：审查用副本
Official compendium：法定药典（主要指USP、 NF）．
USP（The united states Pharmacopeia）：美国药典（现已和NF合并一起出版）
NF（National formulary）：（美国）国家药品集
OFFICIAL＝Pharmacopeia = COMPENDIAL：药典的；法定的；官方的
Agency：审理部门（指FDA等）
Sponsor：主办者（指负责并着手临床研究者）
Identity：真伪；鉴别；特性
Strength：规格；规格含量（每一剂量单位所含有效成分的量）
Labeled amount：标示量
Regulatory specification：质量管理规格标准（NDA提供）
Regulatory methodology：质量管理方法（FDA用于考核原料药或药物产品是
否符合批准了的质量管理规格标准的整套步骤）
Regulatory methods validation：管理用分析方法的验证（FDA对NDA提供的方法进行验证）
Dietary supplement：食用补充品
COS/CEP 欧洲药典符合性认证
ICH（International Conference on Harmonization of Technical Requirements for Registration of Pharmaceuticals for Human Use)人用药物注册技术要求国际协调会议
Acceptance Criteria: 接收标准 (接收测试结果的数字限度、范围或其它合适的量度标准)
Active Pharmaceutical Ingredient (API) (or Drug Substance): 活性药用成分 (原料药)
旨在用于药品制造中的任何一种物质或物质的混合物，而且在用于制药时，成为药品的一种活性成分。此种物质在疾病的诊断，治疗，症状缓解，处理或疾病的预防中有药理活性或其它直接作用，或者能影响机体的功能和结构。
API Starting Material: 原料药的起始物料
用在原料药生产中的，以主要结构单元被并入该原料药的原料、中间体或原料药。原料药的起始物料可能是在市场上有售，能够根据合同或商业协议从一个或多个供应商处购得，或者自己生产。原料药的起始物料通常有特定的化学特性和结构。
Batch (or Lot): 批
由一个或一系列工艺过程生产的一定数量的物料，因此在规定的限度内是均一的。在连续生产中，一批可能对应于与生产的某一特定部分。其批量可规定为一个固定数量，或在固定时间间隔内生产的数量。
Batch Number (or Lot Number): 批号
用于标识一批的一个数字、字母和/或符号的唯一组合，从中可确定生产和销售的历史。
Bioburden: 生物负载
可能存在于原料、原料药的起始物料、中间体或原料药中的微生物的水平和种类(例如，致病的或不致病的)。生物负载不应当当作污染，除非含量超标，或者测得致病生物。
Calibration: 校验
证明某个仪器或装置在一适当的量程范围内所测得的结果与一参照物，或可追溯的标准相比在规定限度内。
Computer System : 计算机系统
设计安装用于执行某一项或一组功能的一组硬件元件和关联的软件。
Computerized System: 计算机化系统 (与计算机系统整合的一个工艺或操作)
Contamination: 污染
在生产、取样、包装或重新包装、贮存或运输过程中，具化学或微生物性质的杂质或外来物质进入或沾染原料、中间体或原料药。
Contract Manufacturer ： 合同制造商 (代表原制造商进行部分制造的制造商)
Criteria：标准
用来描述为了确保原料药符合规格标准，必须控制在预定范围内的工艺步骤、工艺条件、测试要求或其它有关参数或项目。
Cross-Contamination：交叉污染 （一种物料或产品对另一种物料或产品的污染）
Deviation：偏差 （对批准的指令或规定的标准的偏离0
Drug (Medicinal) Product: 药品 (经最后包装准备销售的制剂－参见Q1A)
Expiry Date (or Expiration Date)：有效期
原料药容器/标签上注明的日期，在此规定时间内，该原料药在规定条件下贮存时，仍符合规格标准，超过这一期限则不应当使用。
Impurity：杂质 （存在于中间体或原料药中，任何不希望得到的成分）
Impurity Profile：杂质概况 （对存在于一种原料药中的已知和未知杂质的描述）
In-Process Control (or Process Control)：中间控制，工艺控制
生产过程中为监测、在必要时调节工艺和/或保证中间体或原料药符合其规格而进行的检查。
Intermediate：中间体
原料药工艺步骤中产生的、必须经过进一步分子变化或精制才能成为原料药的物料。中间体可以分离或不分离。(注：只涉及该公司定义为原料药生产起始点以后生产的中间体。)
Manufacture：制造
物料的接收、原料药的生产、包装、重新包装、贴签、重新贴签、质量控制、放行、贮存和分发以及相关控制的所有操作。
Material：物料
原料(起始物料，试剂，溶剂)，工艺辅助用品，中间体，原料药和包装及贴签材料的统称。
Mother Liquor：母液
结晶或分离后剩下的残留液。母液可能含有未反应的物料、中间体、不同级别的原料药和/或杂质。它可用于进一步加工。
Packaging Material：包装材料 （在储运过程中保护中间体或原料药的任何物料）
Procedure：程序
对要进行的操作、采取的预防措施及与原料药或中间体生产直接或间接相关的方法的描述。
Process Aids：工艺辅料
除溶剂外，在原料药或中间体生产中起辅助作用、本身不参与化学或生物学反应的物料(例如，助滤剂、活性炭)。
Production： 生产
在原料药制备过程中，从接收原料，到工艺加工和原料药包装所涉及的所有操作。
Qualification：确认
证明设备或辅助系统，安装正确、工作正常、确实产生预期的结果，并以文件佐证。确认是验证的一部分，但单独的确认步骤不构成工艺验证。
Quality Assurance (QA)：质量保证
确保所有原料药达到其应用所要求的质量，并维持质量体系为目的的全部组织安排的总和。
Quality Control： 质量控制 （是否符合质量规格的检查或测试）
Quality Unit(s) ：质量部门
独立于生产部门的履行质量保证和质量控制职责的组织机构。按照组织机构的大小和结构，可以是单独的QA 和QC部门，或个人，或小组。
Quarantine：待验
在实物上或以其它有效方式将物料隔离，等待对其随后的批准或拒收做出决定的状态。
Raw Material：原料
用来表示中间体或原料药的生产中要用的起始物料、试剂和溶剂的通用专业名词。
Reference Standard, Primary： 基准参考标准品
经广泛分析测试表明具有可信的高纯度的物质。这类标准品可以：1)来源于法定的机构，2)独立合成，3)来自于高纯度的现有生产物料，或4)用进一步精制现有生产物料的方法来制备。
Reference Standard, Secondary ：二级参考标准品
与基准参考标准品比较显示具有规定的质量和纯度，并用作日常实验室分析的参考标准品。
Reprocessing：返工
将不符合标准或规格的一个中间体或原料药返回工艺过程，重复规定的生产工艺中的某一结晶步骤或其它合适的化学或物理处理步骤 (如 蒸馏，过滤，层析，磨粉)，这种做法通常是可以接受的。在中间控制的测试表明一工艺步骤没有完成，从而继续该步骤，是正常工艺的一部分，而不是返工。
Retest Date：复验日期 （物料应当重新检验以确保其仍可使用的日期）
Reworking： 重新加工
将不符合规格标准的中间体或原料药用不同于规定生产工艺的一个或几个步骤进行处理，以得到质量可接受的中间体或原料药(如：用不同溶剂的再结晶)。
Solvent：溶剂（中间体或原料药中用作制备溶液或悬浮液的载体的无机或有机液体）
Signature (Signed)：签名
做过某一特定行动或审核的个人的一种记录。此类记录可以是首字母缩写、手写全名、个人印章或经证实的可靠的电子签名。
Specification：规格
一系列的测试项目、有关的分析程序和适当的认可标准，此标准可以是数值限度、范围或所述测试项目的其它标准。它规定一套标准，物料应当符合该标准，才被认为可以用作其预期的用途。 “符合规格”表示物料按所列的分析程序测试时，会符合所列的接受标准。
Validation：验证
为某一特定的工艺、方法或系统能够持续地产生符合既定接受标准的结果提供充分保证的文件程序。
Validation Protocol：验证方案
说明如何进行验证和规定接受标准的书面计划。例如，生产工艺验证方案确定工艺设备、关键性工艺参数/操作范围、产品特性、取样、收集的测试数据、验证的次数，以及可接受的测试结果。
Expected ield：预期产量
在以前实验室、中试规模或生产数据的基础上，预计任何适当的生产阶段的物料的量或理论产量的百分比。
Theoretical Yield：理论产量
根据投料量，不计任何实际生产中的损失或过失，计算任何适当的生产阶段生产的量。
Changing Room更衣室
First Changing Room一更
Hands Disinfection Room手消室
Airlock Room气闸室
Cleaning Tools Room洁具室
Cleaning Room清洗室
Immediate Package Room内包装室
Emergency Door安全门
Outer Package Removing Room外包清室
Storage Room of Raw Materials存料间
Pulverizing Room粉碎室
Materials Preparing Room备料室
Hard Capsules Filling Room硬胶室
Soft Capsules Room软胶室
Granulating and Drying Room制粒干燥室
Blending Room总混间
Intermediate Station中间站
Tablets Compression Room压片室
Coating Room包衣室
Coating Mixture Preparing Room配浆间
Transferring Window传递窗
Water Purifying Room蒸馏水室
Concentrated Solution Room浓配室
Diluted Solution Room稀配室
preparation of drug products药品制备
pertain to针对
biological products for human use人用生物制品
supersede the regulation代替条例
proposed exemption提议免除
FR/federal register联邦注册表
manufacture, process, pack, hold, 生产，加工，包装，贮存
responsibility and authority职责和权力
approve or reject/withhold批准和拒收
review production records复查生产记录
each shipment每装货量
accommodation (车，船，飞机等的)预定铺位
objectionable microorganism有害微生物
the number of units联合批号
accuracy, sensitivity, specificity, and reproducibility准确性，灵敏性，特异性，重复性
attribute特征，属性
reconstitution配伍
homeopathic drug products顺势治疗药品
compatibility可配伍性
shall be in writing and shall be followed.应成文并遵循
detectable levels可检出水平
incorporated by reference通过参考文献具体化
receipt of material 物料接受
disposition处理
be filtered under positive pressure正压下过滤
laminar or nonlaminar 层流或非层流
aseptic conditions无菌环境
lighting照明
Ventilation, air filtration, air heating and cooling. 通风、空气过滤、空气加热与冷却
Air-handling systems空气输送系统
immediate premises附近建筑物
single-service towels专用毛巾
Charge-in进料
labeled or established amount标示量或规定量
the production of a batch of a drug product生产周期
uniformity and integrity of drug products药品的一致性和完整性
Disintegration time崩解时间
Clarity, completeness, or pH of solutions溶液的澄明度、溶解完全性及pH值
handling装卸
Vial equilibration time: 顶空瓶平衡时间
GC cycle time: 气相色谱循环时间（两次进样的间隔时间）
Injection time: 顶空进样时间
Loop fill time: 定量管充满时间
Loop equilibration time : 定量管平衡时间
Split ratio: 分流比
BPCS(business planning & control system)业务计划及控制系统
AQAI(automated quality assuance inspection equipment)：在线自动质量保证检查设备（如标签条形码系统、称量自动检查系统）
Challenge test 挑战性试验 旨在确定某一个工艺过程或一个系统的某一组件，如一个设备、一个设施在设定的苛刻条件下能否达到预定的质量要求的试验。如干热灭菌程序验证过程中，在被灭菌的玻璃瓶中人为的加入一定量的内毒素，按设定的程序灭菌，然后检查内毒素的残留量，以检查灭菌程序能否确实达到了设定的要求。又如，为了验证无菌过滤器的除菌能力，常以每平方厘米滤膜能否滤除107的缺陷假单孢菌的技术要求来进行菌液过滤试验。
Cip Cleaning in Place 系统或较大型设备在原安装位置不做拆卸及移动条件下的清洁工作。
Certification 合格证明 某一设备/设施安装后经检查和运行，或某项工艺的运行达到设计要求而准于交付使用的证明文件。
Concurrent Validation 同步验证 指生产中在某项工艺运行的同时进行的验证。即从工艺实际运行过程中获得的数据作为验证文件的依据，以证明某项工艺达到预定要求的一系列活动。
Design Qualification DQ 设计确认 对项目设计方案的预审查，包括平面布局、水系统、净化空调系统、待定购设备对生产工艺适用性的审查及对供应厂商的选定等。
Edge of failure 不合格限 指工艺运行参数的特定控制限度，工艺运行时一旦超过这一控制限的后果是工艺失控，产品不合格。
Good engineering practice(GEP)工程设计规范
HAVC Heating ventilation and air conditioning 空调净化系统
Installation qualification(IQ) 安装确认 机器设备安装后进行的各种系统检查及技术资料的文件化工作。
Laboratory information management sysytem (LIMS) 实验室信息管理系统。
Material requirements planning (MRP)物料需求计划系统。
Operational qualification (OQ)运行确认 为证明设备或系统达到设定要求而进行的各种运行试验及文件化工作
OUT-of-specification results 检验不合格结果 指检验不符合注册标准或药典标准的结果。但检验中出现这一情况时，应按书面规程认真调查处理，不允许以反复抽样复检的简单形式放过实际存在的质量问题。
Performance qualification (PQ) 性能确认 为证明设备或系统达到设计性能的试验，就生产工艺而言也可以指 模拟生产试验
Piping&instrument diagrams(P&IDS)管线仪表图
Process flow diagrams(PFDS)工艺流程图
Product validation 产品验证 指在特定监控条件下的试生产，在试生产期间，在试生产期间，为了在正式投入常规生产时有把握的控制生产工艺，往往需要抽取较多的样品，包括半成品及环境监控（必要时）的样品，并需对试生产获得的样品进行必要的稳定性考察试验
Process validation 工艺验证 也译作过程验证
Prospective validation 前验证
Retrospective validation 回顾性验证
Revalidation 再验证
Systems, application and products in data processing(sap)应用及产品数据处理系统
Sip sterilization in place 在线灭菌
Turnover packages 验证文件集
Utility flow diagrams(UFDS)公用介质流程图
User requirement specification (URS)用户需求标准或用户技术要求
Validation master plan 验证总计划
Validation plan 验证计划
Validation report 验证报告
Worst case 最差状况
API 原料药
Guideline 指导原则
Meet the requirement 符合要求
Granulation 颗粒
Particle size 粒度
Milling 磨粉
Micronizing 微粉
Organization structure 组织机构
Packaging包装
Repackaging重包装
Labeling 贴标
Relabeling 重贴标
regulatory inspections evaluation 药政检查
serious GMP deficiencies 严重GMP缺陷
release放行
review and approve审核并批准
delegate 委派
distribution 销售
safety aspects 安全方面
protection of the environment 环境保护
laboratory control record 实验室控制记录
master production instructions 主生产文件
specifications 标准
national laws 国家法律
internal audits self－inspection 自检
sterile APIs 无菌原料药
sterilization 消毒
local authorities 当地药政部门
complaints 投诉
maintaining 维护
extraction 提取
calibrating 校正
fermentation 发酵
stability data 稳定性数据
product quality reviews 产品质量回顾
structural fragment 结构单元
production batch records 批生产记录
supplier 供应商
premises 设施
chemical properties 化学性质
modified facilities 设施变更
case-by-case具体分析
verify证实
critical process关键步骤
corrective actions纠偏措施
consistency of the process工艺的稳定性
purification纯化
early steps 前面几步 final steps 后面几步
analytical methods分析方法
stability monitoring program稳定性监控计划
Isolation分离
Personnel Qualifications人员资格
Personnel Hygiene人员卫生
total microbial counts微生物总数
microbiological specifications微生物标准
Dedicated专用的
mix-ups 混放
Sewage污水
Refuse垃圾
Sanitation卫生
detergent洗涤剂
air driers手烘器
Written procedures书面程序
steam蒸汽
preventative maintenance预防性维护
campaign production集中生产
Drawings图纸
cleaning agents清洗媒介
air filtration空气过滤
exhaust排气
succ essive batches连续批号
Non-dedicated equipent非专用设备
air pressure空气压力
Acceptance criteria可接受标准
dust尘埃
microorganisms微生物
recirculate回风
residues残留
cleaning procedures清洁程序
status状态
established schedule预先计划
intermediate中间体
traceable可追踪的
Drains排水沟
potable water饮用水
Documentation System文件系统
electronic form电子格式
revision histories修订历史
electronic signatures电子签名
scale-up reports扩产报告
technical transfer技术转化
in-house testing内控检测
development history reports开发历程报告
pilot scale中试规模
retention periods保留期限
historical data历史数据
Master Production Instructions生产工艺规程
Out-of-specification不合格
process parameters工艺参数
Blending Batches混批
batch size批量
time limits时间限制
commercial scale 商业规模
critical materials关键物料
Retention Samples留样
incoming materials进厂物料
crystallization结晶
not less than不少于 not more than不大于
recovered solvents回收溶剂
centigrade摄氏度
Veterinary use兽用
sodium hydroxide氢氧化钠
hydrochloric acid盐酸
methanol甲醇
water水分
retention time保留时间
Resolution solution拆分溶液
Residual solvents残留溶剂
Residue on ignition炽灼残渣
Heavy metal重金属
Mobile phase流动相
column柱子
Assay含量
Perform a blank determination作一个空白对照
Container容器
Identification鉴别
dosage form剂型
Melting point熔点
Melting range熔程
Loss on drying干燥失重
proposed indication适应症
route of administration给药途径
Related substance有关物质
Excipient辅料
Specific rotation比旋度
anhydrous无水
at rest静态
in operation动态
structural formula结构式
molecular formula分子式
怒诗
娘们秀才莫猖狂，三落三起理不当。谁敢杀我诸葛亮，老子打他三百枪！”
新工业革命与中国21 世纪发展战略
新工业革命与中国21 世纪发展战略
韩民青
韩民青,山东社会科学院副院长、研究员 中国 济南 250002
两段专业翻译
E-C:These data add further support to a Phase III study, also presented at San Antonio, that demonstrates Femara（弗隆） offers superior time to progression (TTP) and overall response rate, and a survival advantage compared to tamoxifen in the first-line hormonal treatment of postmenopausal women with advanced breast cancer. Novartis is further evaluating Femara compared to tamoxifen in the adjuvant setting. One study is a multinational adjuvant (post-operative) clinical trial evaluating disease-free and overall survival in women with breast cancer who take Femara after having remained disease-free with five years of tamoxifen therapy. A second trial compares five years of Femara to five years of tamoxifen, and to the sequence of two years of Femara and three years of tamoxifen or the reverse - two years of tamoxifen and three years of Femara. These large studies expect to complete enrolment in mid-2002.
这些数据给第三期研究提供进一步的支持，在San Antenrolment也有报道。数据显示，在对后更年期妇女晚期乳腺癌的首轮激素疗法中，和tamaxifen相比，Femara呈现了更好的疾病进展时间（TTP），总有效率及存活优势。
对比tamoxifen，Novartis正在辅助方面进一步评估Femara。其中一项研究是一个跨国辅助（术后）临床试验评估那些经过5年的tamoxifen治疗并保持无病状态，后又服用Femara的乳腺癌妇女的无病和总存活期。另一项试验对比了服用5年Femara和5年tamaxifen，2年Femara和3年tamoxifen，或相反，2年tamoxifen和3年Femara的情况。这些大量的研究预期在2002年中期完成登记。
―――――――――――――――――――――――――――――――――――――――
C-E:本品每克含结合雌激素按雌酮硫酸钠(C18H21O5SNa)和马烯雌酮硫酸钠(C18H19O5SNa)计算，应为标示量的70.0% ~ 95.0%, 马烯雌酮硫酸钠与雌酮硫酸钠含量的比值应为0.35~0.65。 【性状】本品为乳白色乳膏。 【鉴别】（1）取含量测定项下的溶液约2ml ，加98％的硫酸2ml溶解，溶液显橙黄色并有白色沉淀生成，加水稀释后颜色褪去。 （2）在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液两个主峰的保留时间应分别与对照品中雌酮硫酸钠和马烯雌酮硫酸钠峰的保留时间一致。 （3）取含量测定项下的溶液约2ml，显钠盐的鉴别反应（《中国药典》, 2000年, 二部，附录Ⅲ）。 【检查】应符合软膏剂项下有关的各项规定（《中国药典》，2000年，二部，附录1F）。 【含量测定】照高效液相色谱法（《中国药典》，2000年，二部，附录V D）测定。 色谱条件与系统适用性实验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；0.025 moL/L磷酸二氢钾溶液-乙腈（72：28）为流动相；流速为每分钟1ml；柱温为35℃；检测波长为205nm。雌酮硫酸钠与马烯雌酮硫酸钠分离度不低于1.5，理论塔板数以雌酮硫酸钠计不低于3000。
It contains not less than 70.0% and not more than 95.0% of the labelled amount of Conjugated Estrogens, calculated on Estrone Sodium Sulfate and Equilin Sodium Sulfate。The ratio of Estrone Sodium Sulfate to Equilin Sodium Sulfate should be from 0.35 to 0.65.
【Description】milky cream.
【Identification】(1)To 2 ml of the test solution to be examined in the assay add 2 ml of 98% sulphuric acid to solute,the solution becomes orange and has white precipitate. dilute with water and the color fades.
(2)Examine the chromatograms of the solutions to be examined in the assay. The two principal peaks in the chromatogram obtained with the test solution are similar in retention time to the principal peak in the chromatogram obtained with reference solutions of Estrone Sodium Sulfate and Equilin Sodium Sulfate.
(3)Withdraw 2 ml of the test solution to be examined, Comply with the Sodium ion identification test(China Pharmacopeia,2000,the second edition, Appendix Ⅲ).
【Tests】meet all reqirements of the Cream Item(China Parmacopeia,2000,the second edition,Appendix 1F).
【Assay】Comply with the High Performance Liquid Chromatography test(China Pharmacopeia,2000,the second edition,Appendix V D).
The Chromatography may be carried out using:
Octadecylsilyl(ODS) packed column at 35℃,0.025 moL/L potassium dihydrogen phosphate-methyl cyanide（72：28）as mobile phase at a flow rate of 1ml/min. Detection wavelength is 205nm. The resolution of Estrone Sodium Sulfate and Equilin Sodium Sulfate is not less than 1.5. The number of theoretical plates is not less than 3000,calculated on Estrone Sodium Sulfate.
CSH蛋白质纯化课侧记(zz)
从纯化到星辰---CSH蛋白质纯化课侧记(zz)
royluo ( 罗马情结)
本文献给YL
引子
2000年5月6日，我一个人在合肥三孝口书店闲诳,希望买点参考书带出国去。我注意到有一本翻译过来的书， 书名叫做《蛋白质纯化与鉴定实验指南》。这本书很奇怪，里面列出了很多具体实验的步骤和解释。我很快意识到，这本书实际上是冷泉港实验室开设的一门《蛋白质纯化与鉴定》实验课的教材。
这本书深深的吸引了我，因为里面记录的实验十分经典，涵盖了蛋白质纯化中可能用到的大部分手段，并且对实验细节有十分详尽的解释。
我对这本书爱不释手，于是就买了下来, 而且当时就动了上这门课的念头。这是一个很模糊的想法，没有想到的是，五年以后这个想法竟然实现了。
这一系列文章是我对这次上课经历的全面总结，一部分是八卦，一部分是流水账般的记叙，还有一些是从这课程学到的tricks, 最后也掺杂着自己过去做蛋白质纯化的心得。
想到哪说到哪，文字挺松散的，见笑了。
我来解释一下标题。课程结束之后，每一个学员都有一份证书，印着Per Pura Ad Astra 几个大字。这是拉丁语，直译就是“从纯化到星辰”。原始的谚语是,Per Aspera Ad Astra, 意思是through suffering to renown。所以“从纯化到星辰”实际的意思是，做好蛋白质纯化，以后就容易出人头地。呵呵。
（二）同学和老师
冷泉港的《蛋白质纯化与鉴定》培训班历史相当悠久，从1989年开每年都开课，到今年是第十六次。每年都是四月初开始，持续两个星期。值得一提的是，冷泉港有相当多的培训班和会议，是一个科学家交流和学习的中心。这是冷泉港享有盛名的最主要原因。
2004年底, 我下定决心上这门课，于是递交了申请。二月份的时候的到消息，我被录取了，并且还有1000刀的tuition waiver。可我还是高兴不起来，因为还得解决1600刀(学费一共2600刀)。老板人很nice,
但是他实在没钱了，所以我只好咬咬牙自己套腰包解决了，去年的退税就这样全搭进去了,欲哭无泪啊。
四月五号下午我赶到冷泉港，办完登记手续后被告知晚上七点全体开会，与教员和同学见面。老师一共有四个，每人负责一个模块的实验，持续三天时间, 每个老师都有一两个助手帮忙。学生则一共有16个，分成四组，轮转式的做完四个模块。我这一组其他三个人是:来自colorado Boulder 的chad,做有丝分裂的;来自Princeton的Adam,做海洋生物学的。Chad和Adam都是博士后。第三个是来自丹麦的Charlotte，是个博士生，做植物的。
现在开始八卦一下几个老师，^_^
总负责人是来自wisconsin-madison的Richard Burgess教授, 这老头很有意思，带这个培训班已经带了十二年了，到现在还是乐此不疲。他六十年代是watson的博士后，watson似乎跟他关系很好，每年纯化课的时候，watson都会跑到培训班的实验室找Burgess聊天，同时拉他去吃饭什么的。后来的有一天，我还真的看到了watson去找他聊天。不过令人惊讶的是，watson此人相当精神，走路象年轻人。watson此人口碑很不好，很自大。连Burgess教授一次和我们吃饭的时候都承认，watson有时候口无遮拦，让他都觉得很难堪。但是Burgess又承认watson对他自己的学生很支持，很提拔，这几年又尽心尽力为冷泉港筹款，贡献巨大。
第二位教员是来自UCLA 的Albert Courey 教授。这位教授人很nice也很幽默，四位老师中我对他印象最好。申请这个课前，我先跟他发过e-mail 询问这个课的情况，而他也鼓励我申请。这老哥研究果蝇的,但是他却负责教一组纯化转录因子的实验。我一开始不太理解，后来问他的学术经历，才明白是怎么回事。
原来这老哥博士是做生化，博后跟的是robert Tjian （钱泽南），还是做生化，研究转录因子。后来做了faculty之后，决定用果蝇做模型来研究转录因子。他那时侯不懂果蝇的遗传学，完全靠自学和到处问人。
我知道后觉得特佩服，真正的科学家不应该被自己过去所受的训练束缚死了，应该是根据研究的需要随时准备学习新东西。这老哥虽然不是最年轻的，但是却很能跟上年轻人的潮流，比如他说他有一个ipod mini,还在网上itunes商店买过歌。我还跟他就ipod聊了一阵子，因为我也有个ipod。
第三位教员是来自Texas MD anderson cancer center的sue-hwa lin教授。她是一个身材瘦小的中年妇女，台湾人，特搞笑，非常喜欢给我们讲她博士后老板的笑话。一个笑话是这样的, 有一天有一个学生向这个老兄投诉说和实验室另一人有矛盾。这个老兄想了想，然后一本正经的说，和人产生矛盾了，一般有三种选择。第一种呢，就是既然你恨他，那就杀了他好了。那个学生听了之后，差点倒了。这个老兄说看起来你丫没这胆量，那还有第二种选择，就是杀了你自己。那个学生听了几乎要吐血。这老兄一看乐了，然后说你既然没种杀人或者自杀，就剩第三种选择了, 就是ignore that guy!!!哈。还有另一个笑话，sue-hwa lin的博士后老板虽然当了老板，但是还是喜欢做实验，并且和一个博后共用一个bench。有一天那个博后指着这老兄的鼻子说，XXX呀，你把bench弄得太乱了，赶快给我清理干净了。这老兄听了之后也不怒，而是慢条斯理的辩解说，每个人都有自己喜欢的工作方式，我喜欢乱，你丫管我呢，要是不喜欢，我们可以在bench 上画条线划清界线，从此井水不犯河水。哈哈哈。这老美连三八线都出来了。第四位教授是rutgers university 的konstantin Severinov副教授，这老兄是俄罗斯人，这四位老师中 最年轻的一位。此君满头乱发，一脸大胡子，看起来很邋遢，所以一开始我对他印象不佳。后来发现此人相当nice。Konstantin特搞，有一次他做报告，他的电脑的桌面上有一堆乱七八糟的文件夹，其中有一个竟然是divorce!我告诉坐我旁边的一个老美，老美说也注意到了，认为实在是很sad，呵呵。另外，他有两个未成年的儿子，喜欢不断打他手机。结果他常常讲实验讲到一半就得停下来接电话。这个课结束之后，他还跑到冷泉港书店买了一堆虫子毛绒玩具给两个儿子做纪念品。舔犊情深，可见一斑。
（三） 不溶的sigma32
四月六号早上，我们开始了第一模块的实验，Burgess教授负责。这老兄研究了一辈子E.Coli的RNA polymerase。E.Coli RNA polymerase 核心酶是一个蛋白质复合体，只有合成RNA的活性，却没有识别DNA的能力。Sigma系列因子能够识别启动子, 并且与核心酶结合，从而实现转录。我们这个实验的核心主角就是其中一个因子，叫sigma32。Sigma32可以识别heat shock genes的启动子。Sigma 32 过表达在大肠杆菌里面的时候，绝大部分形成了不溶的包涵体(inclusion body),我们的任务就是要用变性剂溶解变性不溶的蛋白，然后做重折叠。
所有的buffer几乎都已经配好了，所以直接做就行了。我们先用1% Triton 来溶解细菌本身的一些蛋白，inclusion body 相当稳定，不溶于triton,所以这一步，绝大部分垃圾就被去掉了。
下一步就是用变性剂来溶解inclusion body。用什么好呢？Burgess教授提到了sarkosyl。sarkosyl(N-十二烷基肌氨酸钠）是一种比较强的阴离子去垢剂, 0.3%的浓度就可以让包涵体溶解。sarkosyl的优点是，虽然在高浓度下有变性作用，低浓度下却对蛋白质有稳定的作用。所以用sarkosyl做重折叠之前的变性剂是再好也不过的了。
Burgess还要我们试了经典的 Gudn HCl（盐酸胍)来变性，作为对比。inclusionbody 在这两种变性剂下很容易就溶解了。然后我们得去掉变性剂，做重折叠。怎么做呢？方法有很多种，最简单的是透析，把变性剂全部换掉。这个方法Burgess并不喜欢，因为，透析是个缓慢的过程。在透析袋里面，蛋白的浓度还是很高。折叠中间产物容易相互接触形成不溶的聚合物。另一种方法是突然稀释变性的蛋白，由于蛋白浓度相对与透析低了很多，好一点。但是问题也是类似的。Burgess提议用逐步滴加稀释的办法。就是放一大烧杯的缓冲液，里面有一个磁石可以不断混合液体，然后一滴一滴加入变性的蛋白溶液。由于烧杯里的溶液蛋白量是逐渐增加的，所以一开始蛋白折叠中间产物能够相互作用的几率大大降低了。Burgess说的还真象那么回事，可事实上，嘿嘿。我们先用试着重折叠Gudn HCl溶解的Sigma32。
一开始还好，滴到后来，溶液就变浑浊了，最后几乎成了冲淡了的牛奶那样的东东。Burgess脸色不好看，说不应该这样的。
我们一离心，沉淀出来一大堆不溶解的蛋白。剩下的上清跑了一个Poros HQ 50阴离子交换柱，拿到的蛋 白很少，回收率小于5%。失败啊。
从这里开始，我要岔开一下，讲一些跟这个模块实验没太大关系，但是很有意思的东西。
（四）Hydrostatic pressure和跑小柱子的trick
Dr. Burgess 假定我们对蛋白质纯化一无所知，所以讲得很细致。比如他特别提到了disposable column的用法。这种小柱子很简单，把beads倒进去，冲洗一下就可以用来纯化蛋白了，很方便。唯一的问题是，由于是依靠重力跑，速度有时候会十分慢。液体流经柱子速度由hydrostatic pressure (静流体压力）来决定。而hydrostatic pressure又是由实际柱高(即液体经过的长度)来决定。如果你嫌液体流得太慢（尤其是洗柱子的时候），可以在柱子下端出口连一个长的塑胶管子或者针管，这样速 度会快很多。这是很简单的小trick, 但我觉得对初做蛋白质纯化的人还是很有帮助的。
我知道一个例子。我原来很喜欢女生A, 有一天晚上主动等在她实验室等她做完实验，就开车送她回家。这一等不得了，从晚上七点等到了凌晨一点。这个过程中，她好像没什么事情，但是每隔20分钟，她就会去一次cold room。作完实验了之后，我好奇的问她，到底是什么试验花了这么长时间，结果她说她在用一个disposable column纯化蛋白，由于beads 稍微多了一点，速度很慢，而protocol有一步要求用数百毫升的洗液来冲洗柱子。所以她每隔二十分钟就去加洗液，所以白白花了好几个小时。我听了之后都要ft了,没想到她们实验室竟然没有人告诉她, 有简单的办法可以让柱子跑得快一点的。只要在下端出口加一个长管子，她至少可以少等两个小时。
当然最简单的办法还不是这个，最简单的办法的是把盛有洗液的容器放高，然后利用虹吸的原理让液体 源源不断的流经柱子。同时，柱子的下端连上塑胶管，弯成一个连通器，这个连通器的高度应该略高于柱面，这样冲洗结束后，柱子就不会干。如果用这种方法，A就不用在实验室待一晚上了，因为一切都是自动完成的。
我现在跟A已经完全没有来往了, 但我对她映象还是十分深刻，主要就是因为她那晚跑柱子的经历。话撤远了，现在再回到蛋百质纯化课。
（五）"万金油"buffer
Dr. Burgess 这人特有意思，喜欢吹嘘他发现的小trick。比如，他得意说他是全美国最早用coomassie blue染蛋白胶的人。据他说，六几年的时候他看到一个澳洲的老兄的一片文章,讲述一种新奇的染料叫考马市亮蓝, 比当时流行的染料amido black灵敏十倍以上。所以他就写了一封信要了一些，结果效果奇好。我们听得都目瞪口呆。
不过Burgess最自豪的，还是他的“万金油”buffer。他告诉我们说，他几十年了，总喜欢用这个buffer的配方，什么蛋白都喜欢这种buffer, 可以说到了包治百病的神奇地步。尽管他吹得神乎其神，配方却十分简单。这个buffer叫TGE,就是Tris, glycerol 和 EDTA。配方是这样的:
50mM Tris pH 7.9
0.5mM EDTA
50mM NaCl
5% glycerol
Tris EDTA NaCl 这三样都没什么，真正关键的是5%glycerol。有了这个glycerol, 很多蛋白，尤其是酶会十分稳定。这个稳定的效果是十分惊人的。r.Burgess就此跟我们讲了他的经历。六十年代的时候，他还是个小博士后，在watson 实验室里干，主要是纯化细菌RNApolymerase的各个亚基。那时候一个大问题是RNA polymerase纯化出来后十分不稳定, 放冰上, 过30分钟，活性还会损失一半。Burgess有一次不小心出了错误，把纯化出来的RNA polymerase和glycerol 混合了。结果意外发现，RNA polymerase 变得十分十分的稳定。
稳定到什么程度呢,就是你把这个酶加上50%glycerol，用平信从美国寄十几天到澳洲，活性还有7~80%！另外Burgess也提到，如果要保存的蛋白有二硫键，加一点DTT，防止蛋白形成非天然的二硫键, 也会对蛋白质的稳定有好处。
为了让我们对这个 "万金油"buffer的好处有感性认识, Burgess设计了一个实验让我们做。
他之前已经准备好了在大肠杆菌中表达的GFP包涵体(inclusion body)。我们把包涵体分成两部分，一部分用guanidinium hydrochloride（盐酸胍）溶解变性，另一部分用sarkosyl (N-十二烷基肌氨酸钠）溶解变性。然后把这些溶解的GFP溶液分到一个96孔板上,每个孔10微升，然后加入２０倍的refolding buffer 来稀释，稀释了之后，变性的GFP就开始重折叠。
我们有一个hampton 卖的refolding 试剂盒，内有十几种不同配方的refolding solution。我们试了所有这些buffer 同时还试了TGE, TGE+15% glycerol, TGE+35% glycerol, TGE+45% glycerol,这四种buffer。由于GFP折叠好了才能发荧光，用一个fluorescence plater reader，我们可以实时监控折叠的效果。结果让人很吃惊，Hamton卖的这个试剂盒，虽然配方都很fancy,但是一塌糊涂，没有一种溶液能让GFP重折叠的很好。相比之下，TGE的四种溶液都很好，GFP重折叠的效率是hampton kit的几十倍。最强的是TGE+35% glycerol。
另外，不论是用Gudn HC变性还是用sarkosyl来变性，TGE+glycerol 的重折叠的效果都很好。
实验结果出来后，看着我们惊讶的表情，Burgess脸上都笑开花了，呵呵。这个实验我还学到的一个教训是,不能迷信商业化的kit, 很多kit吹得很牛，但并不一定真的好用。
（六）兴风作浪的乳糖(lactose)
晚上每天都有人做报告，我觉得让我收获最大的是Bill Studier的报告。本来这个报告是后来才听到的， 但是由于Burgess的模块是唯一的涉及大肠杆菌钟表达蛋白的，我把这一段提前来说说。Studier这老哥是Brookhaven National Laboratory的，一生研究T7 噬菌体，也是T7 RNA polymerase induction system(pET 系列质粒)的发明者。T7 系统在大肠杆菌表达蛋白的应用实在太广泛了，但凡表达蛋白的兄弟姐妹们的不可能不知道这个系统。长话短说，pET系列的质粒都用T7 promoter来控制基因的表达。T7 promoter只能被T7 RNA polymerase 识别，而这个咚咚大肠杆菌是没有的。但是有一些溶原菌株,染色体里面已经整合入了由LacUV promoter和lac operon控制的T7 RNA polymerase 基因片断。如果在细菌培养基里面加入IPTG, 来诱导T7 RNA polymerase 的表达，就可以启动目的蛋白的表达。这个系统非常强大，原因在于T7 RNA polymerase工作起来非常有效率，效率高到什么地步呢？就是表达一个蛋白，表达量可以占到大肠杆菌总蛋白量的50%! 大家可以想象，这种系统虽然很强大，但是表达量太大，对大肠杆菌有毒性，造成的结果就是大肠杆菌十分排斥表达蛋白的质粒。
这一点我深有体会。我曾经想用细菌表达一个蛋白,而且估计这个蛋白会形成包涵体。妖怪的是，用质粒转化蛋白表达菌株BL21(DE3)怎么也不能转化，铺的板一个菌落也没有。我当时就怀疑是因为表达的蛋白对大肠杆菌有毒性，仅仅是本底的一点表达就足以杀死细菌。我来来回回一共转化了五六次，最后 终于找到了唯一的一个菌落。虽然当时我怀疑过本底表达是罪魁祸首，但是我没有仔细想过本底是怎么 来的。这个问题到了bill studier做报告之后，才真相大白。原来我们一般用的LB broth有三种成分，其中一种是tryptone. Tryptone是caseine的酶解产物，而casein又是milk里提取而来。由于milk 有乳糖(lactose)，tryptone里面也有乳糖的污染。Bill studier研究发现即使很微量的lactose也能有效的诱导蛋白表达。原来如此！！！
所以要解决我原来的那个问题，用一种不含有乳糖的media做培养板就完事了。有意思的是，细菌有一种很有意思的特点，如果培养基里有足量的glucose，细菌会优先摄取glucose, 而不能摄取lactose。Bill studier根据这个特点研究出一种可以自动诱导的培养基。这种培养基含有成比例的glucose和lactose。细菌首先摄取glucose，不摄取lactose,当细菌长到一定密度，耗完glucose之后，就开始摄取lactose,从而开始诱导表达。所以用这种培养基养菌，很省事，接种了第二天收细菌，提蛋白就行了。
最后Bill studier老爷子特别强调的是细菌的供氧。氧气是限制细菌生长最重要的瓶颈, 如果有足够氧气在培养基里面, 大肠杆菌的密度可以从一般的OD600 2~3 翻十倍到20~30! 要提高培养瓶的供氧，可以用baffled flask。这种flask的瓶底边缘有几处凹陷(类似于可乐塑料瓶底那样的形状)，能有效增加空气的培养基的混合。
最后，详细内容可以见下列文献:
Protein Expression and purification 41: 207-234 (2005)
（七）古怪的CDC6
这里再给大家讲一个在大肠杆菌中表达蛋白质的例子，一个很夸张的例子，但是很有启发性。Bruce Stillman 是冷泉港的现任主管，是一个绝对的牛人。不但科学做得很好，而且还很爱国。他是澳洲人，在美国待了N年，却从没有加入美国国籍，所以他只是外籍院士。我们的晚间报告有一个是他作的。他主要研究真核生物的DNA复制。这是一个到现在为止都没有完全弄明白的领域。在报告里面，他特别提到了表达纯化CDC6蛋白的经历，我觉得十分有意思。这个蛋白, 用他的话说，是"a pain in the ass"。
CDC6是干什么的呢？这要从ORC说起。真核生物的DNA有多个复制起始位点(replication origin)，ORC(Origin Replication Complex)是一个很大的蛋白复合体，可以识别这些复制起始位点。ORC在整个细胞周期里面都是与DNA结合的。在G1期里面，CDC6这个蛋白会与ORC结合，同时让MCM(DNA解旋酶)也装载到ORC上，形成一个pre-replication protein complex。这个complex 一旦形成，DNA 复制的准备工作就完成，只等其他kinase的激活，细胞从G1进入S期，复制就开始。
Stillman 实验室一直想表达酵母的CDC6和ORC的重组蛋白，然后做结构研究。但是到了CDC6，他们碰到了大麻烦。首先他们尝试真核系统来表达，但是意外的是，他们发现表达出来的CDC6完全没有活性。然后他们尝试用大肠杆菌来表达。首先发现37度诱导表达出来的蛋白不溶，重折叠也没有用。然后他们尝试在室温下诱导表达，发现蛋白虽然可溶了，但是都被降解了。然后呢，他们就想到了加一个GSTtag ,这下好了，蛋白也可溶了，也不被降解了，但是还是没有活性。他们估计是因为GST可以形成dimer，干扰CDC6的正常功能。所以呢，他们重新做了一个construct,在GST和CDC6序列中间加了一个蛋白酶切割位点。正当他们满心欢喜的以为问题解决了的时候，意外又出现了。有GST的CDC6是可溶的，可是一旦把GST切掉了，CDC就沉淀出来了....#%#^&%$^#!!!
几乎是山穷水尽了，但是做这个project的博士后还是没有放弃希望，他做了最后的孤注一掷。他猜到这个蛋白可能很不稳定，对缓冲液要求可能很高，所以他让一个本科生连续试了十多种buffer，最后发现 如果用磷酸钾＋谷氨酸钾缓冲液，切掉GST之后CDC6就不会沉淀了。Stillman认为谷氨酸根和磷酸根跟 氯离子相比更接近与核酸, 可能让CDC6更稳定。这个CDC6一共花了他们18个月时间, 却就这一点小trick! 这以后，他们表达的CDC6都有活性了，后来做了一系列的电镜三维结构重构实验，研究CDC6和ORC的复合体结构。Stillman实验室正在准备一篇文章要投到nature上去。大家等着看吧。
（八）“液体DEAE”
绕了这么大一圈，现在再回到第一个模块的实验来。前面提到Dr.Burgess要我们试Gudn HCl溶解sigma32之后的重折叠，结果很糟糕。我们接着试了用sarkosyl做变性剂的蛋白重折叠。步骤和前一个类似，只是这一次是突然稀释至25倍体积。效果好了很多，至少没有浑浊现象了。接着我们用Poros HS 50，一种阳离子交换柱， 来把可溶的sigma 分离了出来。为什么这一次用Poros HS 50 而不是前面用的阴离子交换柱呢？因为sarkosyl带负电，会与阴离子交换柱结合得很好。再加上sigma32 很奇怪，既有负电的表面，又有带正电的表面，所以可以用阳离子交换柱。值得一提的是绝大部分蛋白质都是偏酸性，所以阴离子交换柱用的比阳离子交换柱频繁得多。
好了，聊完离子交换柱，现在回到Dr Burgess要我们作的另一个很重要的实验。Sigma32在大肠杆菌过表达的时候，绝大部分都是inclusion body,但是也有一部分是可溶的。这些可溶的sigma 32可以和细菌体内的Core RNA polymerase结合形成复合体。我们这个实验就是要把这个复合体纯化出来。核心办法是用免疫亲合柱来纯化。但是为了提高纯化的效果，Burgess要我们提前用PEI沉淀的办法来粗分一下。
PEI 是什么呢？就是polyethyleneimine （聚乙烯亚胺）。这个东东我过去没碰到，所以很感兴趣。PEI呢是一个带正电的polymer，和酸性蛋白质和核酸结合以后聚合体沉淀出来。由于这种结合是受离子强度影响的，感觉上很象DEAE那之类的性质，所以Burgess称之为"液体DEAE"。RNA polymerase和DNA是结合的，所以PEI沉淀DNA的同时，把RNA polymerase+sigma32都沉淀了下来。然后再用高盐洗脱蛋白质，而DNA和PEI结合很紧密，所以还是在沉淀里面。这样一来，好多垃圾蛋白和核酸都被去掉了。到了这一步，还有一个问题。就是洗脱下来的蛋白里面还有PEI, 如果现在就用透析的办法降低盐浓度，PEI和蛋白会重新形成沉淀。所以下一步就是用硫酸胺沉淀的办法把蛋白和PEI分开。用低盐buffer重溶沉淀的蛋白,过免疫亲合柱就行了。免疫亲合柱就没有什么好说的了。最后结果很不错，跑胶后用coomassie blue 就可以清楚的看到RNA polymerase的各个亚基。
（九） 沉淀，沉淀，沉淀
上一部分我匆匆提到了用硫酸氨来去掉PEI(Polyethyleneimine）的步骤。
不常做生化的同学可能对 硫酸氨沉淀 的方法不熟悉。但其实这种沉淀是蛋白质纯化中及其重要的一种方法。说实话我过去也很少接触，但是在这个课里面，四组实验中有三个都用到了这个方法，可见其重要性。硫酸氨沉淀是怎么做的呢?其实很简单，把磨细了的 酸氨粉末往样品溶液里倒就行了，蛋白就会相继沉淀下来。由于不同的蛋白，在不同的硫酸氨浓度下被分别沉淀下来，这种方法把蛋白质样品粗粗的分离一下。这种方法对大量样品尤其好用，因为比较方便快捷便宜。硫酸氨沉淀的优点是什么呢？最大的优点是这东西虽然能让蛋白质沉淀下来，但是不会让蛋白质变性，所以沉淀下来的蛋白质一般可以重新溶解。
其实沉淀蛋白质的方法有很多种，但是对于娇贵的蛋白质来说，很多常用方法都太harsh了。我举两个例子把：TCA沉淀大家都熟悉的。TCA是个强酸，施放出来的质子中和了蛋白质的负电荷，只留下正电荷与TCA形成不溶物，从而变性。丙酮沉淀，通过改变介电常数来降低蛋白质的溶解度，从而沉淀，由于丙酮一类的有机溶剂可以与蛋白质的疏水表面相互作用，所以沉淀的同时，蛋白质也会变性。
硫酸氨沉淀的机理是什么呢？简而言之就是盐析（salt out）。蛋白质在溶液里面溶解度和盐浓度有关系。在低盐浓度下，如果增加盐浓度，会增强蛋白质的溶解，这是因为，盐的离子与蛋白质表面的正负电荷配对，减少了蛋白质电荷表面相互作用的机会。当盐浓度高到一定程度的时候，过多的盐会跟蛋白质疏水表面争夺水分子， 以至于蛋白质疏水表面倾向于相互作用形成聚合物沉淀下来。
×蛩岚比绻擞玫暮每梢 帮很大的忙。Dr. Burgess讲过一个例子。他有一年去一个公司做sabbatical。这个公司是做单抗的，有一个工序是要从ascites fluids 里头把抗体给纯化出来。这个公司用硫酸氨沉淀的方法来粗分蛋白。Burgess很惊讶的发现，这个公司竟然没有做仔细的分析，就随便用了一个很高的硫酸氨浓度，结果把抗体和serum albumin一起沉淀了。但是其实可以用一个低一点的浓度，只把serum
albumin沉淀下来，从而把抗体和serum albumin分开。Serum albumin浓度是非常高的了，这样一分，大大提高了后续纯化步骤的效率。
Dr. Burgess强调说，用什么浓度把什么蛋白沉淀下来，完全是经验性的，而且每次都不一定能重复的。因为是否能沉淀下来跟蛋白质浓度有关系，而每次样品内目标蛋白的浓度不一定一样。有一个很简单的方法可以用来估计蛋白质沉淀所需 酸氨的浓度。把样品分成五份，每份分别加 硫酸氨至20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 离心去掉沉淀，保留上清，再向上清里面添加硫酸氨使浓度从20%到30%, 30%到40%, 40%到50%, 50%到60%, 60%到70%，离心保留沉淀，然后分析沉淀里的蛋白, 看看目标蛋白到底在哪里，就完事了。
中科院一位博导对研究生的要求
中科院一位博导对研究生的要求
Your qualifications for a Ph.D. degree will be judged based on these criteria, which are the keys to differentiate you from a technician.
Performance
1 Progress
2 Efficiency
3 Quality
4 Quantity
5 Originality and novelty
6 Independence
Communication
1 Coordinate with colleagues for the usage of equipments, space and reagents, etc.
2 Active interactions with advisor and colleagues
3 Presentation in lab meetings: treat your every presentation as a publication
4 Be in lab meetings on time and active involvement in the discussion
5 Response to advice appropriately
6 No one is a monster in this lab.
Working as a professional scientist
1 Do you have your working model?
2 Include appropriate controls in EVERY experiment
3 Independently think and design of experiments
4 Knowledge on your field
5 Read at least two original research papers per week
6 If you disagree with your advisor, speak out!
7 There is absolutely NO experiment that does not have a conclusion
8 There is absolutely NO project that does not have a conclusion
9 A tough project does not mean a gradually disappearing or forgettable project
10 Take care about your plants; take actions before they die or flower in tissue culture media
11 Use equipments and reagents in a professional way
Notes
1 Record everything you have done, including negative results; photography is essential
2 Data analysis and conclusions
3 Discussion, comments and plans for future experiments
4 Record your data, even if you do not like them
5 Notes of seminars and paper readings
Working as a dedicated scientist
1 As a scientist, you must dedicate everything to this business
2 Working time: 8-hour is unpractical. There is NO way for a scientist or a Ph.D student to work only 8 hours a day!
3 Go to your mother’s house for afternoon naps and never come back!
4 Vacation: 5 weeks per year (Chinese New Year, the May Day and the National Day breaks are included)
5 Start your morning work not later than 8:30 am and afternoon work no later than 1 pm
6 Surf over the Internet for non-scientific purposes should be less than 30 min a day
7 Reading newspapers should be limited less than 30 min a day
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9 If you are absent from the lab more than one hour, get permission first.
10 Everyone has personal business, but the lab business always has priority unless in emergency
11 In this business, an “average” student who works seven days a week is definitely more productive than a “genius” who works five days a week
12 If you are able to make any major progresses by working 8 hours a day and 5 days a week, every fortunate in this world must be on your side!
Your Efforts
1 What is your career plan?
2 How much efforts you have made?
3 It is the shared responsibilities of your advisor and yourself to move a project forward
4 You should have great concentrations on your project
5 There is no easy way to get your Ph.D. degree unless hard working
6 You should know how to use major database (e.g., NCBI and TARI) but rather than an expert on SINA, SOHU or any other non-scientific websites
7 If you cannot pass the English Test, you are partially disqualified as a Ph.D. candidate in this lab.
8 The US definition for graduate students: those who can survive and colonize on the minimal medium with vender machines as the sole carbon source in the absence of dental insurance!
9 You are working neither for your parents, your parents’ neighbors, nor your friends to solely earn a “glorious” name (Ph.D. degree) per se. You are working for your own career!
10 Working-hard before 30-year-old is the best way to prevent suffers after turning 30
11 We are NO writers or any other non-research professionals
12 A real scientist needs a logic rather than romantic way to think!
13 Use your brains: think and work smartly
14 A good graduate student is not a robot
15 A good graduate student always knows what he/she is doing and what he/she has done
16 A good graduate student always scientifically goes beyond what he/she has been “advised”
17 A good graduate student must independently think about the project and read the data as well as catch hints derived from the data
18 You should learn and eventually know how to interpret your data
19 You should learn and eventually know how to write a paper or a progress report in a professional and logic way
20 You should be capable of tackling technical troubles by smartly using references and by discussing with coworkers
21 If you use your brain, you should be able to avoid unnecessary, stupid mistakes or to avoid making the same mistakes more than once. Many of such mistakes cannot be rescued by money (e.g., the loss of mutant seeds)
22 Mistakes resulted from brain- or thinking-less actions are not tolerated
23 Making mistakes with similar natures more than once is not tolerated
(the end)
岛津液相色谱操作规程
岛津液相色谱操作规程：
一、运行前操作
1，开稳压器
2，开泵，紫外检测器，柱温箱，系统控制器，电脑电源
3，开电脑，开软件 CLASS-VP INSTRUMENT 1 ,嘀声连机成功。
二、使用操作
1，设色谱分析条件
1）file-method-new/open/save
2)instrument setup(设定各单元的参数)
A.pump单元
运行模式：isomrantic（ISO）等浓度
binary gradient（B.GE）梯度
low pressure binary gradient 低压梯度
B.紫外检测
wavelength ch 设波长
acquisition channel 采样通道
run 设采样运行时间
C. SCL-10 AVP 单元：是否外部触发（trigger）
D. time program 一般做梯度时使用
2，准备分析
3，进样分析
1）待仪器稳定，preview观察基线，基线平稳
control－single run，运行单样品
autoincrement
method
data
start－－显示waiting for trigger 后开始进样
进样阀调 load位－－加样10微升（确保无气泡）－－按检测器调零键zero－－进样阀，inject位－－色谱开始工作
2）工作－－stop
3）
4）分析，自动打印
5）下一个样品，每个样品间隔5min
4，关机
用流动相洗20－30min，如长期不用，再用甲醇洗20－30min后关闭软件－计算机主机－显示器－泵－检测器－柱温度箱－控制器
注意事项：
1，先退软件后断电源
2，压力匀>15MPa
3，流动相用毕泵不动
4，管内无泡
5，流速每次升高0.1min/ml，退出系统时，压力每次逐次降低才可。